השפעה אנטי-ביו-פילם וגירוי ריפוי של תחבושות חנקות כסף

תודה שביקרת ב- Nature.com. הגרסה של הדפדפן בה אתה משתמש יש תמיכה מוגבלת של CSS. לקבלת התוצאות הטובות ביותר, אנו ממליצים להשתמש בגרסה חדשה יותר של הדפדפן שלך (או להשבית את מצב התאימות ב- Internet Explorer). בינתיים, כדי להבטיח תמיכה שוטפת, אנו מציגים את האתר ללא סטיילינג או JavaScript.
צמיחה מיקרוביאלית בפצעים מתבטאת לעתים קרובות כביו -פילמים, המפריעים לריפוי וקשה למיגורם. תחבושות כסף חדשות טוענות למאבק בזיהומים בפצעים, אך יעילותם האנטיביופילם והשפעות הריפוי העצמאיות-עצמאיות שלהם אינן ידועות בדרך כלל. תוך שימוש במודלים ביו-פילם חוץ-גופיים in vivo של Staphylococcus aureus ו- pseudomonas aeruginosa, אנו מדווחים על היעילות של תחבושות Ag1+ ייצור יונים; AG1+ תחבושות המכילות חומצה אתילנדימיניטטראצטטית ובנזתוניום כלוריד (AG1+/EDTA/BC), ותלבושות המכילות חנקת כסף (AG Oxysalts). , המייצרים יוני Ag1+, Ag2+ ו- Ag3+ כדי להילחם בביופילם פצע והשפעתו על ריפוי. לתחבושות AG1+ היו השפעות מינימליות על ביו -פילם פצעים במבחנה ובעכברים (C57BL/6J). לעומת זאת, מלחי AG מחומצנים ותלבושות Ag1+/EDTA/BC הפחיתו משמעותית את מספר החיידקים הקיימים בביו -פילמים במבחנה והדגימו ירידה משמעותית ברכיבי החיידקים וה- EPS בביו -פילמים של פצע עכברים. לתחבושות אלה היו השפעות שונות על ריפוי הפצעים הנגועים ביופילם ולא נגועים בביופילם, כאשר תחבושות מלח מחומצן בעלות השפעות מועילות יותר על מחדש מחדש, גודל הפצע ודלקת בהשוואה לטיפולי בקרה ולתחבושות כסף אחרות. התכונות הפיזיקו-כימיות השונות של תחבושות כסף עשויות להשפיע על ביו-פילם וריפוי פצעים, ויש לקחת בחשבון זאת בבחירת רוטב לטיפול בפצעים הנגועים בביופילם.
פצעים כרוניים מוגדרים כ"פצעים שלא מצליחים להתקדם בשלבי הריפוי הרגילים באופן מסודר ובזמן "1. פצעים כרוניים יוצרים נטל פסיכולוגי, חברתי וכלכלי עבור חולים ומערכת הבריאות. ההוצאות השנתיות של NHS על טיפול בפצעים וקומורבידציות נלוות מוערכות בכ -8.3 מיליארד ליש"ט בשנים 2017–182. פצעים כרוניים הם כיום גם בעיה דחופה בארצות הברית, כאשר Medicare מעריך את העלות השנתית של טיפול בחולים עם פצעים במחיר של 28.1 - 96.8 מיליארד דולר.
זיהום הוא גורם מרכזי המונע ריפוי פצעים. זיהומים מתבטאים לעתים קרובות כביו-סרטים, שנמצאים ב 78% מהפצעים הכרוניים שאינם מרפאים. ביו-פילמים נוצרים כאשר מיקרואורגניזמים מחוברים באופן בלתי הפיך למשטחים, כמו משטחי פצע, ויכולים לצבור ליצירת קהילות המייצרות פולימר חוץ-תאי (EPS). ביופילם פצעים קשור לתגובה דלקתית מוגברת המובילה לנזק לרקמות, מה שעלול לעכב או למנוע ריפוי 4. העלייה בנזק לרקמות עשויה להיות נובעת בחלקן מפעילות מוגברת של מטריקס מטלופרוטאינזים, קולגןאז, אלסטאז ומינים חמצן תגובתי 5. יתר על כן, תאים דלקתיים וביופילמים הם עצמם צרכנים גבוהים של חמצן ולכן יכולים לגרום להיפוקסיה ברקמות מקומיות, ומדלדלים תאים של החמצן החיוני הדרוש לתיקון רקמות יעיל6.
ביו -פילמים בוגרים עמידים מאוד לסוכנים אנטי -מיקרוביאליים, הדורשים אסטרטגיות אגרסיביות לבקרת זיהומים ביופילם, כמו טיפול מכני ואחריו טיפול אנטי -מיקרוביאלי יעיל. מכיוון שביו-פילמים יכולים להתחדש במהירות, אנטי-מיקרוביאלים יעילים יכולים להפחית את הסיכון להתבססות מחודשת לאחר התייבשות כירורגית 7.
כסף משמש יותר ויותר בתחבושות אנטי-מיקרוביאליות ומשמש לעתים קרובות כטיפול קו ראשון לפצעים נגועים כרוניים. יש הרבה תחבושות כסף זמינות מסחרית, שכל אחת מהן מכילה הרכב כסף, ריכוז ומטריצת בסיס שונה. ההתקדמות בסרטי זרוע כסף הובילה לפיתוח סרטי זרוע כסף חדשים. צורת הכסף המתכתית (AG0) אינרטית; כדי להשיג יעילות אנטי -מיקרוביאלית, עליו לאבד אלקטרון ליצירת כסף יוני (AG1+). תחבושות כסף מסורתיות מכילות תרכובות כסף או כסף מתכתי, אשר כאשר נחשפים לנוזל מתפרקים ליצירת יוני Ag1+. יוני Ag1+ אלה מגיבים עם תא החיידק, תוך הסרת אלקטרונים מרכיבים מבניים או תהליכים קריטיים הנחוצים להישרדות. הטכנולוגיה המוגנת בפטנט הובילה להתפתחות של תרכובת כסף חדשה, אוקסיסלס AG (Silver Nitrate, AG7NO11), הכלולה בתחבושות פצעים. בניגוד לכסף מסורתי, הפירוק של מלחים המכילים חמצן מייצר מצבי כסף עם ערכיות גבוהה יותר (AG1+, AG2+ו- AG3+). מחקרים חוץ גופיים הראו כי ריכוזים נמוכים של מלחי כסף מחומצנים יעילים יותר מכסף יון יחיד (AG1+) כנגד חיידקים פתוגניים כמו Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus ו- Escherichia coli8,9. סוג חדש נוסף של רוטב כסף כולל מרכיבים נוספים, כלומר חומצה אתילנדימיניניטטראטטית (EDTA) ובנזתוניום כלוריד (BC), המדווחים כי הם מכוונים ל- EPS ביופילם ובכך מגדילים את חדירת הכסף לביו -פילם. טכנולוגיות כסף חדשות אלה מציעות דרכים חדשות למקד ביו -פילמים פצעים. עם זאת, ההשפעה של אנטי-מיקרוביאלים אלה על סביבת הפצעים וריפוי בלתי תלוי בזיהום חשובה כדי להבטיח שהם לא יוצרים סביבת פצעים לא טובה או עיכוב ריפוי. דווח על חששות מפני ציטוטוקסיות כסף חוץ גופית עם מספר תחבושות כסף 10,11. עם זאת, ציטוטוקסיות חוץ -גופית טרם תורגמה לרעילות in vivo, וכמה תחבושות Ag1+ הוכיחו פרופיל בטיחות טוב 12.
כאן, בדקנו את היעילות של תחבושות קרבוקסימתיל -סלולוזה המכילות ניסוחים כסף חדשים כנגד ביו -פילם פצעים במבחנה וב- vivo. בנוסף, הוערכו ההשפעות של תחבושות אלה על תגובות חיסוניות וריפוי ללא תלות בזיהום.
כל התחבושות ששימשו היו זמינות מסחרית. 3M רוטב סיבי ג'ל של Kerracel (3M, Knutsford, בריטניה) הוא רוטב סיבי ג'ל לא אנטי-מיקרוביאלי 100% קרבוקסימתיל-סלולוזה (CMC) ששימש כבישת הבקרה במחקר זה. נבדקו שלוש תחבושות כסף אנטי -מיקרוביאליות CMC, כלומר 3M Kerracel AG רוטב (3M, קנוספורד, בריטניה), המכיל 1.7%. מלח כסף מחומצן (AG7NO11) ביוני כסף גבוה יותר (AG1+, AG2+ו- AG3+). במהלך הפירוק של Ag7no11, יוני Ag1+, Ag2+ ו- Ag3+ נוצרים ביחס של 1: 2: 4. Aquacel AG רוטב נוסף המכיל 1.2% כלוריד כסף (AG1+) (Convatec, Deeside, בריטניה) 13 ו- Aquacel AG+רוטב נוסף המכיל 1.2% כלוריד כסף (AG1+), EDTA ו- Benzethonium chloride (Convatec, Deeside, בריטניה) 14.
הזנים ששימשו במחקר זה היו Pseudomonas aeruginosa NCTC 10781 (Public Health England, Salisbury) ו- Staphylococcus aureus NCTC 6571 (Public Health England, Salisbury).
חיידקים גודלו לילה במרק מולר-הינטון (Oxoid, Altrincham, בריטניה). תרבות הלילה דוללה אז 1: 100 במרק מולר-הינטון ו -200 מיקרומטר צפו על קרומי ציקלופור סטריליים של 0.2 מיקרומטר (Whatman PLC, מיידסטון, בריטניה) על צלחות אגר של מולר-הינטון (סיגמא-אלדריץ 'בע"מ, קנט, בריטניה, בריטניה ). ) היווצרות ביו -פילם קולוניאלית ב 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. ביו -פילמים קולוניאליים אלה נבדקו לצורך התכווצות לוגריתמית.
חותכים את ההלבשה לחתיכות מרובעות של 3 ס"מ 2 וקדם לייסטן עם מים מיונים סטריליים. הניחו את התחבושת על הביופילם של המושבה על צלחת האגר. כל 24 דונם של ביו-פילם הוסרו, וחיידקים בר-קיימא בתוך הביופילם (CFU/ml) כימותו על ידי דילול סדרתי (10–1 עד 10-7) במרק נטרול זווית יום (Merck-Millipore). לאחר 24 שעות של דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, בוצעו ספירת צלחות סטנדרטית על צלחות אגר מולר-הינטון. כל טיפול ונקודת זמן בוצעה בשילוב, וספירות צלחות חזרו על כל דילול.
עור בטן חזיר מתקבל מצד חזירים לבנים גדולים תוך 15 דקות מרגע השחיטה בהתאם לתקני הייצוא של האיחוד האירופי. העור היה מגולח וניקוי מגבוני אלכוהול, ואז הוקפא ב -80 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות כדי להעניק את העור. לאחר הפשרה נשטפו חתיכות עור של 1 ס"מ 2 שלוש פעמים עם PBS, 0.6% נתרן היפוכלוריט, ו -70% אתנול למשך 20 דקות בכל פעם. לפני הסרת האפידרמיס, הסר את כל האתנול שנותר על ידי שטיפה 3 פעמים ב- PBS סטרילי. העור היה תרבותי בצלחת 6 בארות עם קרום ניילון בעובי 0.45 מיקרומטר (Merck-Millipore) למעלה ו -3 רפידות סופגות (Merck-Millipore) המכילות 3 מ"ל סרום שור עוברי (Sigma) בתוספת 10% Dulbecco של Dulbecco של נֶשֶׁר. בינוני (מדיום הנשר המשונה של דולבקו - Aldrich Ltd.).
ביו -פילמים קולוניאליים גודלו כמתואר למחקרי חשיפה ביופילם. לאחר טיפוח הביופילם על הממברנה למשך 72 שעות, הביו -פילם הוחל על פני העור באמצעות לולאת חיסון סטרילית והקרום הוסר. לאחר מכן הודגר הביופילם על דרמיס של החזיר במשך 24 שעות נוספות ב 37 מעלות צלזיוס כדי לאפשר לביו -פילם להתבגר ולהקפיד על עורו של החזיר. לאחר שהביו-פילם התבגר והתחבר, הוחל ישירות על משטח העור של 1.5 ס"מ 2, שהונע מראש במים מזוקקים סטריליים, ונדגר ב 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. חיידקים קיימא הוצגו על ידי מכתים על ידי יישום אחיד של מגיב כדאיות תאי Prestoblue (Invitrogen, Life Technologies, Paisley, בריטניה) על המשטח האפיקי של כל מפלס ודגירתם למשך 5 דקות. השתמש במצלמה הדיגיטלית של Leica DFC425 כדי לצלם מייד תמונות במיקרוסקופ Leica MZ8. אזורים בצבע ורוד כמתו באמצעות Image Pro Software גרסה 10 (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD Image-Pro (Mediacy.com)). סריקת מיקרוסקופיית אלקטרונים בוצעה כמתואר להלן.
חיידקים שגדלו במשך הלילה מדוללים 1: 100 במרק מולר-הינטון. 200 μl של תרבות נוספו לקרום ציקלופור סטרילי 0.2 מיקרומטר סטרילי (Whatman, Maidstone, בריטניה) וציפוי על אגר מולר-הינטון. צלחות ביו -פילם הודגרו ב 37 מעלות צלזיוס למשך 72 שעות כדי לאפשר היווצרות ביופילם בוגר.
לאחר 3 ימים של התבגרות ביו -פילם, הוצב תחבושת מרובעת של 3 ס"מ 2 ישירות על הביופילם ודגור ב 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות. לאחר הסרת התחבושת משטח הביופילם, 1 מ"ל של מגיב כדאיות של תאי Prestoblue (Invitrogen, Waltham, MA) התווסף לפני השטח של כל ביופילם למשך 20 שניות. המשטחים יובשו לפני שהוקלטו שינויי צבע באמצעות מצלמה דיגיטלית של Nikon D2300 (Nikon UK Ltd., קינגסטון, בריטניה).
הכינו תרבויות לילה על אגר מולר-הינטון, העבירו מושבות בודדות ל -10 מ"ל מרק מולר-הינטון ודגירה על שייקר ב 37 מעלות צלזיוס (100 סל"ד). לאחר דגירה של לילה, התרבות מדוללת 1: 100 במרק מולר-הינטון ו -300 μL אותרה על קרום ציקלופור עגול של 0.2 מיקרומטר (Whatman International, Maidstone, בריטניה) על אגר מולר-הינטון ודגור על 37 מעלות צלזיוס תוך 72 שעות ו ו הביופילם הבוגר הוחל על הפצע כמתואר להלן.
כל העבודות עם בעלי חיים בוצעו באוניברסיטת מנצ'סטר תחת רישיון פרויקט שאושר על ידי משרד לרווחת בעלי חיים וביקורת אתית (P8721BD27) ובהתאם להנחיות שפורסמו על ידי משרד הפנים במסגרת ASPA המתוקנת ב -2012. כל המחברים דבקו בהנחיות ההגעה. עכברי C57BL/6J בני שמונה שבועות (Envigo, Oxon, בריטניה) שימשו לכל מחקרים in vivo. עכברים הורדמו עם Isoflurane (Piramal Critical Care Ltd, West Drayton, UK) ומשטחי הגב שלהם היו מגולחים וניקו. לאחר מכן ניתן לכל עכבר פצע כריתת 2 × 6 מ"מ באמצעות אגרוף ביופסיה של סטיפל (Schuco International, Hertfordshire, בריטניה). עבור פצעים הנגועים ביופילם, החל ביופילם קולוניאלי של 72 שעות שגדל על הממברנה כמתואר לעיל על שכבת העור של הפצע באמצעות לולאת חיסון סטרילית מיד לאחר הפציעה וזרק את הממברנה. סנטימטר רבוע אחד של ההלבשה מראש מראש במים סטריליים לשמירה על סביבת פצע לחה. התחבושות הוחלו ישירות על כל פצע וכיסו בסרט 3M Tegaderm (3M, Bracknell, בריטניה) ודבק נוזלי של Mastisol (Eloquest Healthcare, Ferndale, MI) שהוחלו סביב הקצוות כדי לספק הדבקה נוספת. בופרנורפין (Animalcare, יורק, בריטניה) ניתן בריכוז של 0.1 מ"ג/ק"ג כמשכך כאבים. עכברי Cull שלושה ימים לאחר פציעה בשיטת לוח הזמנים 1 והסירו, חצאו ואחסנו את שטח הפצע לפי הצורך.
המוטוקסילין (Thermofisher Scientific) ואאוזין (Thermofisher Scientific) בוצע על פי פרוטוקול היצרן. שטח הפצעים והמחזור מחדש כמתו באמצעות Image Pro Software גרסה 10 (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD).
קטעי הרקמות הועברו בקסילן (Thermofisher Scientific, Loughborough, בריטניה), התייבשו מחדש באתנול מדורגים של 100-50%, ושקעו בקצרה במים מיונים (Thermofisher Scientific). Immunohistochemistry בוצע באמצעות ערכת Vectastain Elite ABC PK-6104 (מעבדות וקטור, Burlingame, CA) על פי פרוטוקול היצרן. נוגדנים ראשוניים לנויטרופילים NIMP-R14 (ThermoFisher Scientific) ומקרופאגים MS CD107B טהור M3/84 (BD Biosciences, Wokingham, בריטניה) היו מדוללים 1: 100 בתמיסה חוסמת והוסיפו למשטח החתוך, ואחריהם 2 נוגדנים אנטי, וקטאסטאין ערכת המצע של ABC ו- Vector Nova Red Peroxidase (HRP) (מעבדות וקטור, Burlingame, CA) ומוספרת עם המטוקסילין. תמונות נרכשו באמצעות מיקרוסקופ אולימפוס BX43 ומצלמה דיגיטלית של Olympus DP73 (Olympus, Southend-on-Sea, בריטניה).
דגימות העור תוקנו ב -2.5% גלוטרלדהיד ו -4% פורמלדהיד ב- 0.1 מ 'HEPES (pH 7.4) למשך 24 שעות ב -4 מעלות צלזיוס. דגימות התייבשו באמצעות אתנול מדורגת וייבשו ב- CO2 באמצעות מייבש נקודה קריטי Quorum K850 (Quorum Technologies Ltd, Loughton, בריטניה) ומפזרים מצופים בסגסוגת פלאדיום זהב באמצעות מערכת פריקת זוהר Quorum SC7620. דגימות צולמו באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סריקה של FEI Quanta 250 (ThermoFisher Scientific) כדי לדמיין את הנקודה המרכזית של הפצע.
TOTO-1 יוד (2 מיקרומטר) הוחל על משטח הפצע של העכבר הנכרת ודגור במשך 5 דקות ב 37 מעלות צלזיוס (ThermoFisher Scientific) וטופל ב- Syto-60 (10 מיקרומטר) ב 37 מעלות צלזיוס (ThermoFisher Scientific). תמונות Z-Stack של 15 דקות נוצרו באמצעות Leica TCS SP8.
נתוני שכפול ביולוגיים וטכניים הוחלפו וניתחו באמצעות תוכנת GraphPad Prism V9 (GraphPad Software, La Jolla, CA). ניתוח חד-כיווני של שונות עם השוואות מרובות באמצעות בדיקת פוסט-הוק של דונט שימש לבדיקת הבדלים בין כל טיפול לבין איבי בקרה שאינם אנטי-אנטי-פרוביאליים. ערך P <0.05 נחשב למובהק.
היעילות של תחבושות סיביות ג'ל כסף הוערכה לראשונה כנגד מושבות ביופילם של סטפילוקוקוס אוורוס ופסאודומונאס אווירוגינוסה במבחנה. תחבושות כסף מכילות נוסחאות שונות של כסף: תחבושות כסף מסורתיות מייצרות יוני AG1+; תחבושות כסף, שיכולות לייצר יוני AG1+ לאחר הוספת EDTA/BC, יכולות להרוס את מטריצת הביופילם ולחשוף חיידקים לכסף תחת ההשפעה האנטיבקטריאלית של הכסף. יונים 15 ותחבושות המכילים מלחי AG מחומצנים המייצרים יוני Ag1+, Ag2+ ו- Ag3+. יעילותו הושוותה ללבוש שליטה שאינו אנטי-מיקרוביאלי העשוי מסיבים משובצים. החיידקים הקיימים שנותרו בתוך הביופילם הוערכו כל 24 שעות למשך 8 ימים (איור 1). ביום 5, הביו -פילם הוחזר מחדש עם 3.85 × 105s. Staphylococcus aureus או 1.22 × 105p. Aeruginosa להערכת התאוששות ביופילם. בהשוואה לתלבושות שליטה שאינן אנטי-טרוביאליות, תחבושות AG1+ השפיעו מינימליות על הכדאיות החיידקית ב Staphylococcus aureus וב- Pseudomonas aeruginosa ביופילמים במשך 5 ימים. לעומת זאת, תחבושות המכילות מלחי Ag ו- Ag1 + + EDTA/BC היו יעילים בהריגת חיידקים בתוך הביופילם תוך 5 ימים. לאחר חיסון חוזר ונשנה עם חיידקים פלנקטוניים ביום 5, לא נצפתה שיקום הביופילם (איור 1).
כימות של חיידקים בר -קיימא בסטפילוקוקוס אאורוס ובביו -פילמים Pseudomonas aeruginosa לאחר טיפול עם תחבושות כסף. מושבות ביו-פילם של סטפילוקוקוס אאורוס ופסאודומונאס אווירוגינוסה טופלו בתחבושות כסף או תחבושות שליטה לא אנטי-אנטי-פרוביאליות, ומספר החיידקים הקיימים שנותרו נקבע כל 24 שעות. לאחר 5 ימים, הביו -פילם הוחזר מחדש עם 3.85 × 105s. Staphylococcus aureus או 1.22 × 105p. מושבות של Bacterioplankton pseudomonas aeruginosa נוצרו בנפרד כדי להעריך את התאוששות הביופילם. גרפים מראים ממוצע +/- שגיאה סטנדרטית.
כדי לדמיין את ההשפעה של תחבושות כסף על כדאיות ביופילם, הוחלו תחבושות על ביו -פילמים בוגרים שגדלו על עור חרסיני ex vivo. לאחר 24 שעות, ההלבשה מוסרת והביופילם מוכתם בצבע תגובתי כחול, שמטבוליזציה על ידי חיידקים חיים לצבע ורוד. ביו -פילמים שטופלו בתחבושות בקרה היו ורודים, מה שמצביע על נוכחותם של חיידקים קיימא בתוך הביופילם (איור 2 א). לעומת זאת, הביו -פילם שטופל בלבוש אוקסיזולים AG היה בעיקר כחול, מה שמצביע על כך שהחיידקים הנותרים על פני עורו של החזיר היו חיידקים שאינם ברורים (איור 2 ב). צבע כחול וורוד מעורב נצפה בביו-פילמים שטופלו בתלבושות Ag1+ המכילות, מה שמעיד על נוכחות של חיידקים בר-קיימא ולא בר-קיימא בתוך הביופילם (איור 2 ג), ואילו תחבושות EDTA/BC המכילות AG1+ היו כחולות בעיקר עם כמה נקודות ורודות. המציין אזורים שאינם מושפעים מלבוש הכסף (איור 2 ד). הכימות של אזורים פעילים (ורודים) ולא פעילים (כחולים) הראו כי תיקון הבקרה היה פעיל 75% (איור 2E). תחבושות AG1 + + EDTA/BC ביצעו באופן דומה לתלבושות מלח מחומצן AG, עם שיעורי ההישרדות של 13% ו -14% בהתאמה. רוטב AG1+ גם הפחית את כדאיות החיידקים ב 21%. לאחר מכן נצפו ביו -פילמים אלה באמצעות מיקרוסקופיית אלקטרונים סריקה (SEM). לאחר טיפול בהלבשת הביקורת והלבשת AG1+, נצפתה שכבה של Pseudomonas aeruginosa המכסה את עור החורש (איור 2F, H), ואילו לאחר הטיפול בהלבשת Ag1+, נמצאו מעט תאים חיידקיים ונמצאו מעט תאי חיידקים מתחת. סיבי קולגן יכולים להיחשב כמבנה הרקמות של עור החזירה (איור 2 גרם). לאחר טיפול בהלבשת AG1 + + EDTA/BC, נראו לוחות חיידקים ולוחות סיבי קולגן בסיסיים (איור 2I).
הדמיה של ביופילם Pseudomonas aeruginosa לאחר טיפול בהלבשת כסף. (A-D) כדאיות חיידקית בביו-פילמים של Pseudomonas aeruginosa שגדלו על עור חזירים הוצגה באמצעות צבע כדאיות של Prestoblue צבע 24 שעות לאחר הטיפול עם תחבושות כסף או תחבושות שליטה לא אנטי-אנטי-פרוביאליות. חיידקים חיים הם חיידקים ורודים, שאינם בר-קיימא ועור חזיר הם כחולים. (ה) כימות של פסאודומונאס Aeruginosa ביו-פילמים שגדלו על עור חרסיני (נקודה ורודה) באמצעות סריקת מיקרוסקופיה אלקטרונית תמונה PRO גרסה 10 (FI) ומטופלת ברוטב כסף או רוטב שליטה לא אנטי-אנטי-אנטי במשך 24 שעות. סרגל סולם SEM = 5 מיקרומטר. (J - M) ביו -פילמים קולוניאליים גדלו על פילטרים והוכתמו בצבע תגובתי Prestoblue לאחר 24 שעות של דגירה עם תחבושות כסף.
כדי לקבוע אם מגע הדוק בין התלבושות לביו -פילמים השפיע על יעילות התלבושות, ביו -פילמים קולוניאליים שהונחו על משטח שטוח טופלו עם התלבושות במשך 24 שעות ואז הוכתמו בצבעים תגוביים. הביופילם הלא מטופל היה בצבע ורוד כהה (איור 2J). בניגוד לביו -פילמים שטופלו בתחבושות המכילות מלחי AG מחומצנים (איור 2K), ביו -פילמים שטופלו בתחבושות המכילות AG1+ או AG1++ EDTA/BC הראו להקות מכתים ורודים (איור 2L, M). צבע ורוד זה מצביע על נוכחות של חיידקים בר -קיימא וקשור לאזור התפר בתוך ההלבשה. אזורים תפורים אלה יוצרים חללים מתים המאפשרים לחיידקים בתוך הביופילם לשרוד.
כדי להעריך את היעילות של תחבושות הכסף in vivo, טופלו פצעים בעלי עובי מלא של עכברים שנדבקו ב- S. aureus בוגרים וב- P. aeruginosa ביו-סרטים בתחבושות שליטה לא אנטי-מיקרוביאליות או בתלבושות כסף. לאחר 3 ימי טיפול, ניתוח תמונות מקרוסקופיות הראה גדלי פצעים קטנים יותר כאשר טופלו בתחבושות מלח מחומצן בהשוואה לתלבושות שליטה לא אנטי-אנטי-פרוביאליות ולתחבושות כסף אחרות (איור 3A-H). כדי לאשר את התצפיות הללו, פצעים נקצרו ושטח הפצעים וכימותו מחדש של שטח הרקמות המוכתמות מחדש של המטוקסילין ואאוזין באמצעות תוכנת Image Pro גרסה 10 (איור 3i-L).
ההשפעה של תחבושות כסף על פני הפצע ואפיתליזציה מחודשת של פצעים הנגועים בביו-פילמים. (A - H) תאים קטנים הנגועים בביו -פילמים של Pseudomonas aeruginosa (A - D) ו- Staphylococcus aureus (E - H) לאחר שלושה ימי טיפול עם רוטב שליטה נונטימיקרוביאלי, רוטב מלח מחמצן, Ag1+ רוטב ו- Ag1+ הַלבָּשָׁה. תמונות מקרוסקופיות מייצגות. פצעי עכברים עם רוטב AG1 + + EDTA/BC. (IL) זיהום Pseudomonas aeruginosa מייצג, קטעים היסטולוגיים המוכתמים בהמטוקסילין ואאוזין, המשמשים לכימות שטח הפצע והתחדשות האפיתל. כימות שטח הפצע (M, O) ואחוזים מחדש מחדש (N, P) של פצעים הנגועים ב- Pseudomonas aeruginosa (M, N) ו- Staphylococcus aureus (O, P) ביו -פילמים (לכל קבוצת טיפול n = 12). גרפים מראים ממוצע +/- שגיאה סטנדרטית. * פירושו p = <0.05 ** פירושו p = <0.01; סולם מקרוסקופי = 2.5 מ"מ, סולם היסטולוגי = 500 מיקרומטר.
לכימות שטח הפצע בפצעים הנגועים בביו-פילם של Pseudomonas aeruginosa (איור 3 מ ') הראו כי פצעים שטופלו באוקסיסלס AG היה בגודל פצע ממוצע של 2.5 מ"מ 2, ואילו להתלבשות בקרה שאינם אנטי-אנטי-אנטי-פרוביאליים היה גודל פצע ממוצע של 3.1 מ"מ 2, שאינו אינו ממוצע. נָכוֹן. הגיע למשמעות סטטיסטית (איור 3M). p = 0.423). פצעים שטופלו ב- AG1+ או AG1++ EDTA/BC לא הראו ירידה בשטח הפצע (3.1 מ"מ 2 ו -3.6 מ"מ, בהתאמה). טיפול בהלבשת מלח AG מחומצן קידם את האפיתליזציה מחדש במידה רבה יותר מאשר חבישת הבקרה הלא-אנטי-מיקרוביאלית (34% ו -15%, בהתאמה; P = 0.029) ו- AG1+ או AG1++ EDTA/BC (10% ו- 11%) ( איור 3n). ו , בהתאמה).
מגמות דומות בשטח הפצע והתחדשות האפיתל נצפו בפצעים שנדבקו בביו -פילמים S. aureus (איור 3O). תחבושות המכילות מלחי כסף מחומצן הפחיתו את שטח הפצע (2.0 מ"מ 2) ב- 23% בהשוואה לבקרת ההלבשה הלא אנטי-אנטי-קרוביאלית (2.6 מ"מ), אם כי הפחתה זו לא הייתה משמעותית (p = 0.304) (איור 3O). בנוסף, שטח הפצע בקבוצת הטיפול AG1+ הצטמצם מעט (2.4 מ"מ 2), ואילו הפצע שטופל ב- AG1++ EDTA/BC לבוש לא הפחית את שטח הפצע (2.9 מ"מ 2). מלחי חמצן של AG קידמו גם את האפיתליזציה מחדש של פצעים הנגועים בביו-פילם S. aureus (31%) במידה רבה יותר מאלו שטופלו בתחבושות בקרה שאינן אנטי-קרביים (12%, p = 0.003) (איור 3p). Ag1+ רוטב (16%, p = 0.903) ו- Ag+ 1+ רוטב EDTA/BC (14%, P = 0.965) הראו רמות של התחדשות אפיתל הדומה לבקרה.
כדי לדמיין את ההשפעה של תחבושות כסף על מטריצת הביופילם, בוצעו מכתים של Syto 60 יוד (איור 4). TOTO 1 יוד הוא צבע הניתן לתאים שניתן להשתמש בו כדי להמחיש במדויק חומצות גרעין חוץ תאיות, הנמצאות בשפע ב- EPS של ביו-פילמים. Syto 60 הוא צבע חדיר בתא המשמש כ- countrestain16. התצפיות של TOTO 1 ו- SYTO 60 יוד בפצעים מחוסנים עם ביו-פילמים של Pseudomonas aeruginosa (איור 4A-D) ו- Staphylococcus aureus (איור 4i-l) הראו כי לאחר 3 ימי טיפול, EPS בביו-פילם הופחת באופן משמעותי. המכיל מלחים מחומצנים AG ו- AG1 + + EDTA/BC. תחבושות AG1+ ללא רכיבי אנטיביופילם נוספים הפחיתו משמעותית את ה- DNA ללא תאים בפצעים שחוסנו באמצעות Pseudomonas aeruginosa, אך היו פחות יעילים בפצעים שחוסנו עם Staphylococcus aureus.
הדמיה in vivo של ביו -פילם פצעים לאחר 3 ימי טיפול בשליטה או תחבושות כסף. תמונות קונפוקליות של Pseudomonas aeruginosa (A - D) ו- Staphylococcus aureus (I - L) הוכתמו בטוטו 1 (ירוק) כדי לדמיין חומצות גרעין חוץ -תאיות, מרכיב של פולימרים ביופילם חוץ תאיים. כדי להכתים חומצות גרעין תוך -תאיות, השתמש בסיטו 60 (אדום). חומצות. P. סריקת מיקרוסקופיית אלקטרונים של פצעים הנגועים ב- Pseudomonas aeruginosa (E - H) ו- Staphylococcus aureus (M - P) ביו -פילמים לאחר 3 ימי טיפול עם בקרה ותלבושות כסף. סרגל סולם SEM = 5 מיקרומטר. סרגל סולם הדמיה קונפוקלי = 50 מיקרומטר.
סריקת מיקרוסקופיית אלקטרונים הראה כי עכברים חוסנו עם מושבות ביו-פילם של Pseudomonas aeruginosa (איור 4E-H) ו- Staphylococcus aureus (איור 4M-P) היו פחות משמעותיים בחיידקים בפצעים שלהם לאחר 3 ימי טיפול בכל תחבושות הכסף.
כדי להעריך את ההשפעה של תחבושות כסף על דלקת פצעים בעכברים הנגועים בביופילם, קטעים של פצעים הנגועים בביופילם שטופלו בתלבושות שליטה או כסף במשך 3 ימים הוכתמו באופן אימונוהיסטוכימי באמצעות נוגדנים ספציפיים לנויטרופילים ומקרופאגים. קביעה כמותית של נויטרופילים ומקרופאגים באופן פנימי. רקמת גרנולציה. איור 5). כל תחבושות הכסף הפחיתו את מספר הנויטרופילים והמקרופאגים בפצעים הנגועים בפסאודומונאס אווירוגינוסה בהשוואה לתחבושות שליטה שאינן אנטי-אנטי-פרוביאליות לאחר שלושה ימי טיפול. עם זאת, טיפול בלבוש מלח כסף מחומצן הביא להפחתה רבה יותר בנויטרופילים (p = <0.0001) ומקרופאגים (p = <0.0001) בהשוואה לתחבושות כסף אחרות שנבדקו (איור 5i, J). למרות ש- AG1++ EDTA/BC הייתה השפעה רבה יותר על הביופילם הפצע, היא הפחיתה את רמות הנויטרופיל והמקרופאג במידה פחותה מאשר רוטב AG1+. פצעים מתונים שנדבקו בביו -פילם S. aureus נצפו גם לאחר התלבשות עם Ag (p = <0.0001), Ag1+ (p = 0.0008) ו- Ag1 ++ EDTA/BC (p = 0.0043) אוקסיזולים בהשוואה לבקרה. מגמות דומות נצפות בנויטרופניה. תחבושת (איור 5K). עם זאת, רק רוטב מלח ה- AG המחומצן הראה ירידה משמעותית במספר המקרופאגים ברקמת גרנולציה בהשוואה לבקרה בפצעים הנגועים בביו -פילמים S. aureus (p = 0.0339) (איור 5L).
נויטרופילים ומקרופאגים כימותו בפצעים שנדבקו ב Pseudomonas aeruginosa ו- Staphylococcus aureus ביו-פילמים לאחר 3 ימי טיפול בשליטה לא אנטי-אנטי-פרוביאלית או תלבושות כסף. נויטרופילים (AD) ומקרופאגים (EH) כימותו בקטעי רקמות המוכתמים בנוגדנים הספציפיים לנויטרופילים או מקרופאגים. כימות של נויטרופילים (I ו- K) ומקרופאגים (J ו- L) בפצעים הנגועים ב Pseudomonas aeruginosa (i ו- J) ו- Staphylococcus aureus (K & L) ביו -פילמים. N = 12 לקבוצה. גרפים מראים ממוצע +/- שגיאה סטנדרטית, ערכי משמעות בהשוואה להתלבשות בקרה לא אנטי-בקטריאלית, * פירושו p = <0.05, ** פירושו p = <0.01; *** פירושו p = <0.001; מציין p = <0.0001).
לאחר מכן הערכנו את ההשפעה של תחבושות כסף על ריפוי עצמאי לזיהום. פצעים כריתתיים שאינם נגועים טופלו בלבוש בקרה שאינו אנטי-אנטי-פרוביאלי או רוטב כסף למשך 3 ימים (איור 6). בין תחבושות הכסף שנבדקו, רק פצעים שטופלו בלבוש המלח המחומצן נראו קטנים יותר בתמונות מקרוסקופיות מאשר פצעים שטופלו בבקרה (איור 6A-D). כימות שטח הפצע באמצעות ניתוח היסטולוגי הראה כי שטח הפצע הממוצע לאחר הטיפול בהלבשת אוקסיזולים AG היה 2.35 מ"מ 2 לעומת 2.96 מ"מ 2 עבור פצעים שטופלו בקבוצת הביקורת, אך הבדל זה לא הגיע למשמעות סטטיסטית (p = 0.488) (איור . לעומת זאת, לא נצפתה הפחתה בשטח הפצע לאחר טיפול ב- AG1+ (3.38 מ"מ 2, p = 0.757) או AG1++ EDTA/BC (4.18 מ"מ 2, p = 0.054) בהשוואה לקבוצת הביקורת. התחדשות אפיתל מוגברת נצפתה עם רוטב אוקסיזול AG בהשוואה לקבוצת הביקורת (30% לעומת 22%, בהתאמה), אם כי זה לא הגיע למשמעות (p = 0.067), זה די משמעותי ומאשר תוצאות קודמות. רוטב עם אוקסיזולים מקדם-אפיתליזציה מחדש. -פיתליזציה של פצעים לא נגועים 17. לעומת זאת, לטיפול עם תחבושות AG1+ או AG1++ EDTA/BC לא השפיעו או הראה ירידה באפיתליזציה מחדש בהשוואה לבקרה.
השפעה של אימת פצע כסף על ריפוי פצעים בעכברים לא נגועים עם כריתה מוחלטת. (AD) תמונות מקרוסקופיות מייצגות של פצעים לאחר שלושה ימי טיפול עם רוטב שליטה לא אנטי-אנטי-רובלי ורוטב כסף. (EH) קטעי פצע ייצוגיים מוכתמים בהמטוקסילין ואאוזין. כימות שטח הפצע (I) ואחוזי מחדש של מחדש מחדש (J) חושבו מקטעים היסטולוגיים בנקודת האמצע של הפצע באמצעות תוכנת ניתוח תמונה (n = 11–12 לקבוצת טיפול). גרפים מראים ממוצע +/- שגיאה סטנדרטית. * פירושו p = <0.05.
לסילבר יש היסטוריה ארוכה של שימוש כטיפול אנטי -מיקרוביאלי בריפוי פצעים, אך הניסוחים והשיטות המסירה הרבות השונות עלולות לגרום להבדלים ביעילות אנטי -מיקרוביאלית 18. יתר על כן, תכונות האנטיביופילם של מערכות מסירת כסף ספציפיות אינן מובנות לחלוטין. למרות שהתגובה החיסונית המארחת יעילה יחסית כנגד חיידקים פלנקטוניים, היא בדרך כלל פחות יעילה כנגד ביו -פילמס 19. חיידקים פלנקטוניים הם פגוציטוז בקלות על ידי מקרופאגים, אך בתוך ביו -סרטים, תאים מצטברים מהווים בעיות נוספות על ידי הגבלת התגובה המארחת עד כמה תאים חיסוניים יכולים לעבור אפופטוזיס ולשחרר גורמים דלקתיים כדי לשפר את התגובה החיסון 20. נצפה כי לויקוציטים מסוימים יכולים לחדור לביו -פילמס 21 אך אינם מסוגלים לחיידק פגוציטוז ברגע שההגנה הזו תיפגע 22. יש להשתמש בגישה הוליסטית כדי לתמוך בתגובה החיסונית המארחת כנגד זיהום ביופילם פצעים. התייבשות פצעים עלולה לשבש פיזית את הביופילם ולהסיר את מרבית הביובורדן, אך התגובה החיסונית של המארח עשויה להיות לא יעילה כנגד ביו -פילם שנותר, במיוחד אם התגובה החיסונית המארחת נפגעת. לפיכך, טיפולים אנטי -מיקרוביאליים כמו תחבושות כסף יכולים לתמוך בתגובה החיסונית המארחת ולבטל זיהומים ביופילם. הרכב, ריכוז, מסיסות ומצע מסירה יכולים להשפיע על היעילות האנטי -מיקרוביאלית של כסף. בשנים האחרונות ההתקדמות בטכנולוגיית עיבוד הכסף הפכה את התחבושות הללו ליעילות יותר 9,23. ככל שטכנולוגיית ההלבשה של הכסף מתקדמת, חשוב להבין את היעילות של התחבושות הללו בבקרת זיהום בפצעים, וחשוב מכך, את ההשפעה של צורות כסף חזקות אלה על סביבת הפצע והריפוי.
במחקר זה השווינו את היעילות של שתי תחבושות כסף מתקדמות עם תחבושות כסף קונבנציונאליות המייצרות יוני Ag1+ כנגד ביו -פילמים באמצעות דגמי חוץ גופיים שונים וב- vivo. הערכנו גם את ההשפעה של תחבושות אלה על סביבת הפצע וריפוי בלתי תלוי בזיהום. כדי למזער את השפעת מטריצת המסירה, כל תחבושות הכסף שנבדקו הורכבו מ- Carboxymethylcellulose.
ההערכה המקדימה שלנו של תחבושות הכסף הללו כנגד ביו -פילמים קולוניאליים של פסאודומונאס אווירוגינוסה וספילוקוקוס אאורוס מראה כי בניגוד לתחבושות AG1+ מסורתיות, שתי תחבושות כסף מתקדמות, Ag1++ EDTA/BC ומלחי AG עם חמצן, הם יעילים ב -5. כמה ימים. בנוסף, תחבושות אלה מונעות גיבוש מחדש של ביופילם לאחר חשיפה חוזרת ונשנית לחיידקים פלנקטוניים. רוטב AG1+ הכיל כלוריד כסף, אותו תרכובת כסף ומטריצת בסיס כמו AG1++ EDTA/BC, והשפיעה מוגבלת על הכדאיות החיידקית בתוך הביופילם באותה תקופה. התצפית כי הלבשת AG1++ EDTA/BC הייתה יעילה יותר כנגד ביו -פילם מאשר רוטב AG1+ המורכב מאותה מטריצה ​​ותרכובת כסף תומכת ברעיון כי נדרשים מרכיבים נוספים כדי להגביר את היעילות של כלוריד כסף נגד ביופילם, כפי שדווח במקום אחר 15. תוצאות אלה תומכות ברעיון ש- BC ו- EDTA ממלאות תפקיד נוסף התורם ליעילות ההלבשה הכוללת וכי היעדרו של רכיב זה ב- AG1+ תחבושות עשוי לתרום לכישלון בהפגנת יעילות חוץ גופית. מצאנו כי תחבושות מלח AG מחומצן המייצרות יוני Ag2+ ו- Ag3+ הציגו יעילות אנטיבקטריאלית חזקה יותר מאשר Ag1+ וברמות הדומות ל- Ag1++ EDTA/BC. עם זאת, בשל פוטנציאל הרדוקס הגבוה, לא ברור כמה זמן יוני Ag3+ נשארים פעילים ויעילים כנגד ביו -פילמים של פצעים ולכן ראויים למחקר נוסף. בנוסף, ישנן תחבושות רבות ושונות המייצרות יוני AG1+ שלא נבדקו במחקר זה. תחבושות אלה מורכבות מתרכובות כסף שונות, ריכוזים ומטריצות בסיסיות, מה שעשוי להשפיע על מסירת יוני Ag1+ ועל יעילותם כנגד ביו -פילמים. ראוי גם לציין כי ישנם מודלים רבים ומבחנים במבחנה וב- vivo המשמשים להערכת היעילות של תחבושות פצעים כנגד ביו -סרטים. סוג המודל המשמש, כמו גם תכולת המלח והחלבון של המדיה המשמשת במודלים אלה, ישפיעו על יעילות ההלבשה. במודל in vivo שלנו, אפשרנו לביו -פילם להתבגר במבחנה ואז העברנו אותו למשטח העור של הפצע. התגובה החיסונית של העכבר המארח יעילה יחסית כנגד חיידקים פלנקטוניים המופעלים על הפצע, ובכך יוצרים ביופילם ככל שהפצע מרפא. תוספת של ביופילם בוגר לפצע מגבילה את היעילות של התגובה החיסונית המארחת ליצירת ביו -פילם בכך שהיא מאפשרת לביופילם הבוגר לבסס את עצמה בתוך הפצע לפני שתוכל להתחיל ריפוי. לפיכך, המודל שלנו מאפשר לנו להעריך את היעילות של תחבושות אנטי -מיקרוביאליות על ביו -פילמים בוגרים לפני שהפצעים מתחילים לרפא.
מצאנו כי התאמת ההלבשה השפיעה על היעילות של תחבושות הכסף על ביו-פילמים מגודלים חוץ-גופיים ועור חרסיני. קשר הדוק עם הפצע נחשב קריטי ליעילות האנטי -מיקרוביאלית של ההלבשה 4,25. תחבושות המכילות מלחי AG מחומצנים היו במגע הדוק עם ביו -פילמים בוגרים, וכתוצאה מכך ירידה משמעותית במספר החיידקים הקיימים בתוך הביופילם לאחר 24 שעות. לעומת זאת, כאשר מטופלים בתלבושות AG1+ ו- AG1++ EDTA/BC, נותרו מספר משמעותי של חיידקים קיימא. תחבושות אלה מכילות תפרים לאורך כל הרוטב, היוצר חללים מתים המונעים קשר הדוק עם הביופילם. במחקרי המבחנה שלנו, אזורים שאינם מגעיים אלה מנעו את הריגתם של חיידקים בר-קיימא בתוך הביופילם. הערכנו את כדאיות החיידקים רק לאחר 24 שעות של טיפול; עם הזמן, ככל שההלבשה הופכת לרוויה יותר, יתכן שיש מקום פחות מת, ומפחית את האזור עבור חיידקים קיימא אלה. עם זאת, זה מדגיש את חשיבות הרכב ההלבשה, ולא רק את סוג הכסף ברוטב.
בעוד שמחקרים חוץ גופיים מועילים להשוואה בין היעילות של טכנולוגיות כסף שונות, חשוב גם להבין את ההשפעות של תחבושות אלה על ביו -פילמים in vivo, שם תגובות רקמות ומארחות חיסון תורמות ליעילות התלבושות כנגד ביו -פילמים. ההשפעה של תחבושות אלה על ביו -פילמים פצעים נצפתה באמצעות מיקרוסקופיית אלקטרונים סריקה וכתמי EPS של הביופילם באמצעות צבעי DNA תוך -תאיים וחוץ תאיים. גילינו שאחרי 3 ימי טיפול, כל התחבושות היו יעילות להפחתת ה- DNA נטול התאים בפצעים הנגועים בביופילם, אך ההלבשה AG1+ הייתה פחות יעילה בפצעים הנגועים בסטפילוקוקוס. מיקרוסקופיית אלקטרונים סריקה הראתה גם כי היו פחות חיידקים משמעותיים בפצעים שטופלו בתלבושות הכסף, אם כי הדבר היה בולט יותר עם רוטב המלח AG המחומצן והלבשת Ag1++ EDTA/BC בהשוואה לרוטב AG1+. נתונים אלה מראים כי תחבושות הכסף שנבדקו היו דרגות שונות של השפעה על מבנה הביופילם, אך אף אחת מהתחבשות הכסף לא הצליחה למגר את הביופילם, ותומכת בצורך בגישה הוליסטית לטיפול בזיהומים ביופילם פצעים; שימוש בסרטי זרוע כסף. לפני הטיפול קדמה התייבשות פיזית להסרת מרבית הביופילם.
פצעים כרוניים נמצאים לרוב במצב של דלקת קשה, כאשר עודף תאים דלקתיים נותרו ברקמת הפצע למשך זמן ממושך, גורמים לנזק לרקמות ומדלדלים את החמצן הדרוש למטבוליזם תאי יעיל ותפקוד בפצע 26. ביו -פילמים מחמירים את סביבת הפצע העוינת הזו על ידי השפעה שלילית על ריפוי במגוון דרכים, כולל עיכוב של התפשטות תאים והגירה והפעלה של ציטוקינים פרו -דלקתיים 27. ככל שתלבושות כסף נעשות יעילות יותר, חשוב להבין את ההשפעה שיש להם על סביבת הפצע והריפוי.
מעניין, למרות שכל תחבושות הכסף השפיעו על הרכב הביופילם, רק תחבושות מלח כסף מחומצן הגבירו את האפיתליזציה מחדש של פצעים נגועים אלה. נתונים אלה תומכים בממצאים הקודמים שלנו17 ובאלה של Kalan et al. (2017) 28, שהפגינו פרופילי בטיחות ורעילות טובים של מלחי כסף מחומצנים, שכן ריכוזי כסף נמוכים היו יעילים כנגד ביו -פילמים.
המחקר הנוכחי שלנו מדגיש את ההבדלים בטכנולוגיית הכסף בין תחבושות כסף אנטי-מיקרוביאליות להשפעה של טכנולוגיה זו על סביבת הפצע וריפוי בלתי תלוי בזיהום. עם זאת, תוצאות אלה שונות ממחקרים קודמים המראים כי רוטב Ag1 + + EDTA/BC שיפר את פרמטרי הריפוי של אוזני ארנב פצועות in vivo. עם זאת, זה יכול להיות נובע מהבדלים במודלים של בעלי חיים, זמני מדידה ושיטות יישום חיידקים 29. במקרה זה, מדידות הפצעים נלקחו 12 יום לאחר הפציעה כדי לאפשר לחומרים הפעילים של ההלבשה לפעול על הביופילם לאורך תקופה ארוכה יותר. זה נתמך על ידי מחקר שהראה כי כיבי רגליים נגועים קלינית שטופלו ב- AG1 + + EDTA/BC גדלו בתחילה בגודל לאחר שבוע של טיפול, ואז במהלך שלושת השבועות הבאים של הטיפול ב- AG1 + + EDTA/BC ותוך 4 שבועות מרגעם שימוש בלא אנטימיקרוביאלים. סמים. תחבושות CMC כדי להפחית את גודל הכיבים 30.
צורות וריכוזים מסוימים של כסף הוכחו בעבר כציטוטוקסיות במבחנה 11, אך תוצאות אלה במבחנה לא תמיד מתורגמות לתופעות לוואי in vivo. בנוסף, ההתקדמות בטכנולוגיית הכסף והבנה טובה יותר של תרכובות כסף וריכוזי תחבושות הובילו להתפתחות של הרבה תחבושות כסף בטוחות ויעילות. עם זאת, ככל שטכנולוגיית ההלבשה של הכסף מתקדמת, חשוב להבין את ההשפעה של התלבושות הללו על סביבת הפצע 31,32,33. בעבר דווח כי השיעור המוגבר של האפיתליזציה מחדש תואם לשיעור מוגבר של מקרופאגים M2 אנטי דלקתיים בהשוואה לפנוטיפ ה- M1 הפרו-דלקתי. זה צוין במודל עכבר קודם בו הושוו תחבושות פצעים הידרוג'ל מכסף עם סולפדיאזין מכסף והידרוגלים לא אנטי-אנטי-כרוביים 34.
פצעים כרוניים עשויים להפגין דלקת מוגזמת ונצפה כי נוכחותם של עודף נויטרופילים עלולה להזיק לריפוי פצע 35. במחקר שנערך בעכברים שדלוקים בנויטרופיל, נוכחותם של נויטרופילים עיכבה מחדש מחדש מחדש. נוכחותם של עודף נויטרופילים מובילה לרמות גבוהות של פרוטאזות ומיני חמצן תגוביים, כמו סופרוקסיד וחמצן מי חמצן, הקשורים לפצעים כרוניים וריפוי איטי 37,38. באופן דומה, עלייה במספרים מקרופגים, אם לא מבוקרים, יכולה להוביל לריפוי פצעים מעוכבים 39. עלייה זו חשובה במיוחד אם מקרופאגים אינם מסוגלים לעבור מפנוטיפ פרו-דלקתי לפנוטיפ פרו-ריפוי, וכתוצאה מכך פצעים שלא יצאו מהשלב הדלקתי של Healing40. צפינו בירידה בנויטרופילים ובמקרופאגים בפצעים הנגועים בביופילם לאחר 3 ימי טיפול בכל תחבושות הכסף, אך הירידה הייתה בולטת יותר עם תחבושות מלח מחומצן. ירידה זו עשויה להיות תוצאה ישירה של התגובה החיסונית לכסף, תגובה לירידה בביובורדן, או שהפצע נמצא בשלב מאוחר יותר של ריפוי ולכן תאי חיסון בפצע מופחתים. הפחתת מספר התאים הדלקתיים בפצע עשויה לשמור על סביבה שתורמת לריפוי פצעים. מנגנון הפעולה של האופן בו אוקסיזלטים AG מקדמים ריפוי עצמאי בזיהום אינו ברור, אך היכולת של אוקסיזלטים AG לייצר חמצן ולהשמיד רמות מזיקות של מי חמצן, מתווך של דלקת, עשוי להסביר זאת ודורש מחקר נוסף 17.
פצעים נגועים כרוניים ללא ריפוי מהווים בעיה הן לרופאים והן לחולים. למרות שתלבושות רבות טוענות ליעילות אנטי -מיקרוביאלית, מחקרים כמעט ולא מתמקדים בגורמי מפתח אחרים המשפיעים על מיקרו -סביבת הפצע. מחקר זה מראה כי לטכנולוגיות כסף שונות יש יעילות אנטי -מיקרוביאלית שונה, וחשוב מכך, השפעות שונות על סביבת הפצע והריפוי, ללא תלות בזיהום. למרות שמחקרים אלה במבחנה וב- vivo מראים את היעילות של התחבושות הללו בטיפול בזיהומים בפצעים ובקידום ריפוי, יש צורך במחקרים מבוקרים אקראיים כדי להעריך את היעילות של תחבושות אלה במרפאה.
מערכי הנתונים המשמשים ו/או מנותחים במהלך המחקר הנוכחי זמינים מהמחבר המתאים בבקשה סבירה.